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06–Inoculação
das sementes de trigo com o micélio
Procedimento
A inoculação dos grãos
de trigo esterilizados consiste em se introduzir nos frascos um pequeno fragmento
do micélio aderido ao ágar (retirado do tubo de ensaio com
a cultura desenvolvida) de forma que esse micélio cresça do
pedaço de ágar para os grãos de trigo existentes no
frasco.
A inoculação é feita
sempre na proximidade do bico de Bunsen aceso de forma rápida porém
sem criar muita turbulência de ar pela movimentação
das mãos. A inoculação é feita da mesma forma
usada para a transferência do micélio para um novo meio de
cultura ,ou seja deve-se flambar os tubos de ensaio e trabalhar com a haste
esterilizada pelo fogo e resfriada antes de se tocar no micélio
ou nos grãos esterilizados.
A tampa do frasco de palmito
deve ser aberta o mínimo possível apenas para permitir a
passagem da haste com o micélio que será inoculado nos grãos
de cereais. Após colocado o pedaço de ágar com o micélio
dentro do frasco, encobri-lo com os grãos de trigo para assegurar
um melhor contato entre o micélio e os grãos de trigo.
Durante a transferência
,evitar tocar a haste metálica com o pedaço de micélio
em ágar em qualquer lugar que não seja o interior do frasco
com os grãos para não se introduzir nenhum contaminante aos
grãos esterilizados.
Incubação
Deixar os frascos com o trigo inoculado em um local limpo e com temperatura
ambiente próxima de 25ºC. Não permitir que a temperatura
suba muito nesse local de forma que uma pequena circulação
de ar deve ser permitida .
Observar diáriamente
o crescimento do micélio nos frascos fazendo uma agitação
do conteúdo dos frascos a cada 2 dias em média para acelerar
a colonização dos grãos pelo micélio.
Qualquer frasco que apresente
aspecto dos grãos melados e com cheiro ruim ,além da presença
de micélio de mofos coloridos (verde,azul,etc) diferentes do micélio
branco do cogumelo deve ser descartado pois estará contaminado.Levar
para um local longe , os frascos contaminados com bactérias ou bolores
para evitar contaminar mais frascos com grãos sadios. Os frascos
contaminados com bactérias ou bolores devem ser esterilizados antes
que sejam abertos para proceder a lavagem dos mesmos. Isso evita a dispersão
de esporos de contaminantes no ar , o que aumentaria ainda mais a carga
de esporos presentes no ar.Impede-se também a ingestão ou
aspiração de esporos pelas pessoas que fazem a limpeza dos
frascos, os quais podem chegar a causar doenças.
Não deixar passar
muito tempo para se usar os grãos após terem sido totalmente
invadidos pelo micélio ,pois além da dificuldade de se separar
os grãos uns dos outros , esse micélio começará a
envelhecer e perderá o seu vigor para produzir os cogumelos.
Devemos lembrar que o
cultivo de cogumelos é uma cultura dinâmica e que deve ser
escalonada para aproveitar-se todo o potencial da semente e do composto.
Usos
da semente após ser colonizada
Esses grãos de trigo colonizados pelo micélio serão
então usados para se inocular o composto diretamente ou ainda para
se fazer uma nova geração de grãos esterilizados usando-se
os próprios grãos de trigo já tomados pelo micélio
da fase anterior ,ou seja faz-se uma transferência de grãos
para grãos com a finalidade de se acelerar a produção
e aumentar as quantidade de micélio disponível.
Quanto mais micélio for usado
na inoculação do composto, mais rápido este será colonizado,
dificultando a colonização por microorganismos competidores.
Deve-se nesse caso observar a pureza
do micélio presente nos grãos de trigo da primeira fase
para que não se corra o risco de se perder todas as fases seguintes
devido as contaminações presentes nos frascos da primeira
fase. A inoculação de grãos com o uso de grãos é feita
com uma espátula ou colher préviamente esterilizadas e
que devem ser sempre flambadas entre uma transferência e outra.
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